Then I grew up, I still confused about my life but I still walked ahead even though I didn’t know anythings.

And now I know anything but my life don’t change. I remain keep the old ways that start from the beginning. I don’t  alternate something at all because I be faithful that all things on the world have own destiny. I be belief in my destiny. If in the future I will fall down, I may cry but I will not sad. Because it’s my way that I choose and I will fight for me and everybody who loved me.

ทั้งหมดนี้ มันทำให้ฉันคิดได้ว่า ค่าของคน มันไม่ได้อยู่ที่การแต่งตัว เสื้อผ้า หรืออาชีพใดๆหรอกนะ ลุงแกก็ไม่ค่อยมีอันจะกินอยู่แล้ว อาชีพที่ทำอยู่ วันๆนึงจะได้สักกี่บาทเชียว แต่แกก็ยังคงมีน้ำใจกับสิ่งที่อยู่รอบๆตัว อย่างไม่ใช้ข้อจำกัดของตัวเองมาเป็นข้ออ้าง หลายๆคนปฏิเสธที่จะทำสิ่งดี เพราะเพียงคำว่า ไม่สะดวก ไม่มีเวลา หรือฉันไม่พร้อม อันนี้ก็ไม่เถียงหรอกนะ เพราะต่างคนก็ต่างสถานการณ์อ่ะ แต่เมื่อใดก็ตามที่เราพอจะมีเวลา มีกำลังทรัพย์ หรือมีสติปัญญาเพียงพอที่จะช่วยเหลือคนรอบข้างได้ ไม่ต้องยิ่งใหญ่ถึงกับประเทศชาติก็ได้ เมื่อนั้นขอให้คุณรีบทำเถอะนะ เพราะอย่างน้อยมันก็เพื่อความสุขในตัวของคุณเอง

cell cultureที่เราเลี้ยงกันโดยทั่วไปนั้น สามารถเกิดการcontaminateได้ ซึ่งการcontaminateนี้สามารถเกิดได้จากหลายๆสาเหตุ เช่น

- เครื่องมือไม่สะอาดพอ

- มีการปนเปื้อนจาก nutrient mixture

- ตู้incubator มีการปนเปื้อน

- ความไม่สะอาดของผู้ทำการทดลองเอง

สำหรับสิ่งที่ทำให้เซลล์ของเราเกิดการปนเปื้อนได้นี้ ก้อเช่น ยีสต์, แบคทีเรีย, รา เป็นต้น โดยส่วนมากแล้ว การcontaminateจะเกิดจากแบคทีเรียเป็นส่วนใหญ่ ถ้าหากไม่สังเกตดีๆ เราจะไม่รู้เลยว่า เซลล์นี้ได้มีการcontaminateไปแล้ว อาจต้องใช้เวลาประมาณ1-2วัน จะเห็นได้เลยว่ามีเดียของเราขุ่นผิดปกติ แต่ถ้ามีการสังเกตที่ระยะต้นๆ โดยใช้กล้องจุลทรรศน์กำลังขยาย 60xหรือ100x เราจะเห็นเจ้าตัวแบคทีเรียนี้ได้เลย ลักษณะของมัน ก้อขึ้นกับชนิดของแบคทีเรียเอง แต่สำหรับการcontaminateพวกยีสต์นี้ จะเห็นได้ช้ากว่าแบคทีเรีย เนื่องจากว่ามันโตได้ช้ากว่า ส่วนการcontaminateที่เกิดจากเชื้อรานั้น ค่อนข้างจะรุนแรงที่สุด แต่ต้องขอโทษด้วยที่ไม่สารถอธิบายลักษณะการcontaminateแบบนี้ได้ เนื่องจากยังไม่มีประสบการณ์นะค่ะ

แล้วเมื่อมีการcontaminateเกิดขึ้นแล้วนั้น จะต้องมีการทำความสะอาดตู้incubatorทันที เพื่อป้องกันไม่ให้เกิดการflowของเชื้อได้ การcleanตู้incubatorนั้น ต้องใช้cleaning solutionสำหรับincubatorที่มีวัสดุเป็นทองแดง (ห้ามใช้alcohol) ถ้าการcontaminateนี้เกิดขึ้นกับหลายๆคน ควรจะเปิดUVภายในตู้incubatorไว้เป็นเวลา1คืน เพื่อฆ่าเชื้อโรคทั้งหมด

1. DNA templateเพื่อใช้เป็นแม่แบบเริ่มต้นในการสังเคราะห์เส้นอื่นๆต่อไป

2. Deoxynucleotideทั้งสี่ชนิด ได้แก่ A, T, C, G

3.Thermostable DNA polymerase enzyme

4. Oligonucleotide primer

5. Buffer

สำหรับขั้นตอนที่สำคัญในการเพิ่มจำนวนDNAได้แก่

1. Denaturation เป็นขั้นตอนที่ทำให้DNAเส้นคู่กลายเป็นเส้นเดี่ยว โดยใช้ความร้อนที่อุณหภูมิ 90-95 องศาเซลเซียส

2. Annealing เป็นขั้นตอนที่ให้คู่primerสามารถจับกับDNA templateได้ เพื่อใช้ในการเริ่มต้นการสังเคารห์DNAเส้นใหม่ โดยใช้อุฌหภูมิประมาณ 45-60 องศาเซลเซียส

3. Extension เป็นขั้นตอนเพิ่มสายDNAเข้าไปต่อที่ปลาย3′ของprimer โดยอาศัยdeoxyribonucleotideที่ใส่เข้าไป นอกจากนี้ยังต้องอาศัยthermostable DNA polymerase enzyme เช่น Taq polymerase อุณหภูมิอยู่ในช่วง 70-75 องศาเซียลเซียส

นอกจากนี้ยังมีขั้นตอนอื่นๆของเทคนิคPCRที่ำเป็นอีกด้วย เช่น ก่อนที่ตะเริ่มต้นการdenaturationควระมีการpreheatก่อนที่อุณหภูมิประมาณ70องศาเซลเซียส ประมาณ5นาที เพื่อทำให้enaymeต่างๆพร้อมที่จะทำงานในการsynthesisสายDNAได้ แล้วเมื่อเสร็จสิ้นขั้นตอนทุกอย่างจนถึงขั้นสุดท้ายของextension processแล้ว อาจะมีการให้ความร้อนต่อไปอีกที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียส 5นาที เพื่อทำให้ขั้นตอนการเพิ่มจำนวนเส้นDNAเป็นไปอย่างสมบูรณ์ที่สุด

สำหรับการเตรียมnutrient mixtures เช่น HAMF-12 นั้น เริ่มต้นจากการละลายHAMF-12ในน้ำ 3B 2nd clavedก่อน แล้วทำการปรับค่า pH ให้อยู่ในช่วงที่เหมาะสม ประมาณ 7.4 หลังจากนั้นให้นำsolutionดังกล่าวไปกรองผ่านfilter membraneภายในห้องcultureเพื่อป้องกันการปนเปื้อนจากแบคทีเรียหรือยีสต์ หลังจากกรองเสร็จเรียบร้อยแล้ว ให้เติมantibioticลงไป เพื่อป้องกันการcontaminateอีกที ทั้งนี้เราสามารถเพิ่มgrowth factorsต่างๆเพิ่มเข้าไปด้วยก้อได้ โดยจะอยู่ในรูปของserumที่เพิ่มลงไป

เช่นตอนที่เราจะให้อาหารเซลล์นั้น ก้อจะมีการเตรียม mediaด้วยสัดส่วน HAMF-12+10%serum เป็นต้น

ถ้าพูดถึงwordpressมันก้อเป็นอารมณ์คล้ายๆblogของแต่ละคนแหละนะ เป็นตัวsoftwareที่แจกให้ใช้ได้ฟรีทั่วโลก ทำให้ค่อนข้างเป็นที่นิยมของคนทั่วไป รวมไปถึงคนไทยด้วย(ก้อเพราะว่ามันไม่ต้องเสียเงินนี่แหละ) wordpress มีการใช้งานที่ค่อนข้างง่าย สามารถปรับเปลี่ยนรูปแบบหรือลักษณะอื่นๆได้โดยไม่ยากเกินไปสำหรับผู้ที่เริ่มต้นเล่นblogใหม่ๆ

ต่อจากนี้คือไปอ่านมาจากอินเตอร์เนทนะ ก้อเลยจะมาเล่าให้ฟัง

ตัวwordpressนี้ถูกเขียนขึ้นมาจากภาษา PHP และใช้งานร่วมกับฐานข้อมูล MySQL ภายในสัญญาอนุญาตใช้งานแบบ GNU General Public License MySQL ภายในสัญญาอนุญาตใช้งานแบบ GNU General Public License ในการแสดงเนื้อหาของblogและการบริหารส่วนต่าง ๆ ของหน้าจอนั้น WordPress ใช้ไฟล์ธีม (theme) ซึ่งบรรจุไปด้วยแม่แบบสำหรับแสดงข้อมูลชนิดต่าง ๆ และเพจ (pages) ไฟล์ข้อความเหล่านี้จะประกอบไปด้วยโค้ด PHP, XHTML และ CSS เพื่อใช้ในการควบคุมการแสดงผลบทความบนที่หน้าเว็บ

WordPress มีธีมมากมายให้เลือกใช้ ดังนั้นจึงไม่จำเป็นที่จะต้องไปออกแบบเอง เพียงแต่เรียนรู้เกี่ยวกับ WordPress และรู้ว่ามันทำงานอย่างไรก็พอ เราก็อาจจะสามารถแก้ไขธีมของเว็บเพื่อปรับแต่งการแสดงผลและเพิ่ม คุณลักษณะเด่น ๆ ที่น่าสนใจเข้าไปได้

สำหรับขั้นตอนของการทำwestern blotคือ

1. เตรียมsample

สำหรับ cell line นั้น จะต้องถูกlyseก่อนโดยใช้ lysis buffer เพื่อทำลายผนังเซลล์ และแยกtotal proteinออกมา จากส่วนอื่นๆที่ไม่ต้องการ

2. gel electrophoresis

เป็นเทคนิคการแยกโปรตีนตามmolecular weight โดยgelที่ใช้ จะประกอบไปด้วย stacking geและseparation gel

stacking gel –> เป็นส่วนของgelชั้นบนสุด มีความละเอียดของgelต่ำ เพื่อทำให้โปรตีนทั้งหมดมารวมอยู่ ณ ที่เดียวกัน เพื่อที่จะได้เริ่มต้นจากจุดเดียวกัน

separating gel –> เป็นส่วนของgelที่ต่อจากstacking gel เป็นบริเวณที่ใช้แยกโปรตีนที่มีขนาดแตกต่างกันออกไป

3. Transfer

เป็นการย้ายโปรตีนจากgelไปยัง nitrocellulose membraneหรือPVDF membrane

4. Blocking

block nonspecific ด้วย 5%skim milk

5. Detection ด้วย primaryและsecondary antibody

Primary antibody เป็นantibodyที่specificต่อตัวโปรตีนของเรา

Secondary antibody เป็นantibodyที่specificต่อprimary antibodyอีกที (เพื่อความspecificและเพื่อใช้ในการdetectตัวโปรตีนของเราด้วย)

6. Analysis

ทำได้หลายวิธีเช่น

-  Colorimetric detection

- Chemiluminescent detection

- Radioactive detection

- Fluorescent detection เป็นต้น

1. Intracellular domain โดยส่วนนี้จะbindingกับcytoskeleton

2. Transmembrane domain ทำหน้าที่เชื่อมระหว่างintracellular และ extracellular domain

3. Extracellular domain ส่วนนี้จะbindingกับ adhesion moleculeโดยตรง

หน้าที่ของadhesion moleculeมีอยู่อย่างหลากหลาย เช่นcell growth, cell differentiation, embryogenesis, immune cell transmigration และยังเกี่ยวข้องกับcancerอีกด้วย

adhesion moleculeสามารถแบ่งออกได้เป็น4กลุ่มใหญ่คือ

1. Immunoglobulin superfamily (Ig) เป็น calcium-independent transmembrane glycoproteins ประกอบไปด้วย

- intercellular adhesion molecules (ICAMs)

- vascular-cell adhesion molecule (VCAM-1)

- platelet-endothelial-cell adhesion molecule (PECAM-1)

- neural-cell adhesion molecule (NCAM)

2. Integrins เป็นnoncovalently heterodimeric ของalpha และ beta subunit integrinเป็นtransmembraneที่มีการแสดงออกตลอดเวลา แต่จะต้องมีการกระตุ้นโดยligandมาก่อน

3. Cadherins เป็นcalcium-dependent adhesion molecules เกียวข้องโดยตรงกับกระบวนการ embryonic development และ tissue organization

4.Selectins มีบทบาทที่สำคัญอย่างมากเกี่ยวกับการเริ่มต้นของleukocyteในระบบimmune ในช่วงที่เกิด inflammation

selectins ประกอบไปด้วย

- Endothelial (E)-selectin

- Eukocyte (L)-selectin

- Platelet (P)-selectin

TGF-beataย่อมาจาก Transforming growth factor beta เป็นcytokineชนิดหนึ่ง โดยมีreceptorคือ Tbeta-RIและTbeta-RII เมื่อTGF-betaมาจับกับTbeta-RII แล้วจะมีการphosphorylationให้กับTbeta-RIต่ิอ หลังจากนั้นจะมี Smad proteinเข้ามา จนcomplexดังกล่าวเคลื่อนที่เข้าสู่nucleusต่อไป เพื่อทำให้เกิดกระบวนการ gene transcription

TGF-beta ประกอบไปด้วย 3 isoforms คือ TGF-beta1, TGF-beta2 และ TGF-beta3 ซึ่งโดยทั่วไปแล้วจะมีต้นกำเนิดมาจากTGF-beta1

สำหรับหน้าที่ของ TGF-beta จะเกี่ยวข้องกับ กระบวนการdifferentiation, growth inhibition, cell apoptosis and control proliferation แต่หากเซลล์มีความผิดปกติเกิดขึ้น ก้อพบว่าTGF-betaก้อจะสูญเสียหน้าที่การทำงานไปด้วย ทำให้เซลล์ดังกล่าวไม่อยู่ในความควบคุมของร่างกาย จนกระทั่งกลายเป็นมะเร็งในท้ายที่สุด ความผิดปกติของTGF-betaนี้พบได้ในมะเร็งหลายๆชนิด เช่นมะเร็งลำไส้, มะเร็งเต้านม หรือมะเร็งต่อมลูกหมากเป็นต้น

โรคชนิดนี้เป็นอาการที่น้ำดีไม่สามารถเคลื่อนที่จากตับมายังบริเวณของลำไส้เล็กได้ เนื่องจากเกิดการอุดตันที่บริเวณท่อน้ำดีนั่นเอง การอุดตันนี้อาจเกิดขึ้นมาจาก สภาวะการเป็นนิ่ว หรือ การเป็นเนื้องอก นอกจากนี้อาจเกิดจากพันธุกรรม, ความผิดปกติของเซลล์ตับ หรือเซลล์ท่อน้ำดีเอง ผู้ป่วยที่เป็นโรคนี้จะมีอาการตัวเหลือง ปัสสาวะสีเข้ม อุจจาระสีซีด ท้องโตและอาจเกิดภาวะแทรกซื้อนจนกลายเป็นมะเร็งต่อไปได้อีกด้วย

มีรายงานพบความสัมพันธ์ระหว่างstage of diseaseกับ adhesion moleculeตัวหนึ่งที่ชื่อว่าCD44 โดยทางคณะได้รายงานไว้ว่ายิ่งมีระยะการเป็นโรคที่ยาวนานมากขึ้น CD44 ก็มีการแสดงออกที่มากขึ้นด้วยเช่นกัน และการแสดงออกของCD44นี้ ยังเกี่ยวข้องโดยตรงกับ hyaluronic acid หรือ HA อีกด้วย ซึ่งถือเป็นligandหลักของCD44 ความสัมพันธ์ระหว่างCD44กับHAนี้สามารถไปเพิ่มให้เกิดการเพิ่มจำนวนของcholangiocyte cell อันเป็นผลให้เกิดการอักเสบได้ต่อไปเรื่อยๆนั่นเอง